Правовою основою двостороннього співробітництва в галузі культури є Угода між Міністерством культури України та Міністерством культури Чеської Республіки про співробітництво в галузі культури (від 15.12.2016 р.).
Протягом останніх років в Чеській Республіці були реалізовані десятки проєктів в рамках культурної дипломатії. За сприяння Посольства Україна була представлена на більшості чеських найвідвідуваніших фестивалів, ярмарків та виставок у сферах книговидавництва, туризму, кіноіндустрії.
За організаційної участі Посольства проводились Тижні українського кіно, конкурси перекладачів з української на чеську мову, конференції україністів, надавалася підтримка на здійснення перекладів творів української літератури на чеську мову; організовувалися мистецькі та фотоекспозиції, виступи провідних українських музичних виконавців; реалізовувалися соціальні проєкти; відзначалися пам’яті дати в історії України та традиційні українські свята; вживалися заходи з метою збереження та впорядкування українських місць пам’яті на території ЧР.
Основними напрямами двостороннього співробітництво в галузі освіти є розвиток співпраці між вищими навчальними закладами двох країн та здійснення обмінів освітянами з метою вивчення та обміну досвідом.
Зокрема, cпільні науково-дослідні проекти реалізовують: Київський національний університет імені Т.Шевченка та Технологічний університет м. Брно; Херсонський державний університет та Інститут ботаніки Академії наук ЧР; Київський національний університет імені Т.Шевченка та Інститут органічної хімії та біохімії ЧР; Інститут фізики напівровідників імені В.Є.Лашкарьова НАН України та Інститут фізики Карлового університету; Фізико-технічний інститут низьких температур імені Б.І.Вєркіна НАН України та Інститут фізики матеріалів Академії наук ЧР; Київський національний університет технологій та дизайну та Технічний університет м. Ліберець; Львівський національний університет імені Івана Франка та Карлів університет; Національний університет біоресурсів і природокористування України та Університет імені Томаші Баті м. Злін; Інститут проблем матеріалознавства імені І.М.Францевича НАН України та Технологічний університет м. Брно; Інститут хімії поверхні імені О.О.Чуйка НАН України та Технічний університет м. Острава.
На запрошення керівництва Карлового університету, в Празі перебувала делегація Тернопільського медичного університету імені І.Горбачевського, яка взяла участь у науковому семінарі та заходах з відзначення 165-річчя від дня народження Івана Горбачевського.
В рамках Меморандуму про взаєморозуміння між Міністерством освіти і науки України та Чеською агенцією розвитку протягом останніх років чеськими фахівцями було здійснено низку візитів в Україну з метою проведення тренінгів та надання експертної допомоги зі створення програм та вироблення критеріїв оцінювання якості загальної середньої освіти. Українські освітяни перебували в Чехії з метою вивчення чеського досвіду управління навчальними закладами, організації інклюзивної та позашкільної освіти, розвитку системи оцінювання якості освіти.